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默瑞生物TwistDx試劑盒又來現(xiàn)貨了,需要訂購的請速速聯(lián)系我們小瑞,手慢無!!
一個(gè)月內(nèi),學(xué)術(shù)期刊連發(fā)兩篇論文!上半年引爆生物圈的華人科學(xué)家張鋒教授團(tuán)隊(duì)又有新動(dòng)作!這次,他在一月內(nèi),分別在《Nature》、《Science》連發(fā)兩篇論文!他將CRISPR-Cas13a改造成了靈敏度達(dá)到了阿摩爾級(aM,10的負(fù)18次方摩爾每升),可以檢測單分子的SHERLOCK技術(shù)。而這其中,RPA起到了不小的作用。
那么,什么是RPA呢?
RPA,即重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù),是在由多種酶和蛋白的參與下,在恒溫條件下實(shí)現(xiàn)核酸指數(shù)擴(kuò)增的技術(shù),被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。
RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,反應(yīng)溫度在37°C左右。
RPA的反應(yīng)原理
RPA的反應(yīng)過程,首先是重組酶與引物結(jié)合,形成蛋白-DNA復(fù)合物。接著在dsDNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成,對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。而被替換的DNA鏈與SSB(單鏈DNA結(jié)合蛋白)結(jié)合,防止進(jìn)一步被替換。在這個(gè)體系中,由兩個(gè)相對的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過程進(jìn)行得非???,一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。
RPA與相關(guān)技術(shù)的比較
與PCR實(shí)驗(yàn)相比,RPA實(shí)驗(yàn)?zāi)茉诤愣囟认逻M(jìn)行全程實(shí)驗(yàn),沒有復(fù)雜的操作,對儀器及人員的要求不高,適合基層或現(xiàn)場快速診斷。
而另一種新興技術(shù),LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名為“環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)”,由于其簡便的操作,也被視為PCR技術(shù)強(qiáng)有力的競爭者。在此,讓我們對比下LAMP與RPA兩種試劑盒進(jìn)行的實(shí)驗(yàn):
RPA試劑盒 | ||
主要組分 | 鏈置換DNA聚合酶 | 重組酶;單鏈結(jié)合蛋白;鏈置換DNA聚合酶 |
適反應(yīng)溫度 | 60-65℃ | 37-40℃ |
推薦反應(yīng)時(shí)間 | 40min左右 | 20min左右 |
引物數(shù) | 2對 | 1對 |
保存形式 | 液體 | 凍干粉;液體 |
檢測方式 | 熒光目視;比濁法實(shí)時(shí)濁度儀 | 電泳;試紙條;熒光定量 |
擴(kuò)增產(chǎn)物可否用于下游應(yīng)用 | 否 | 是 |
可否Multiplex/多重反應(yīng) | 否 | 是 |
缺點(diǎn) | 氣溶膠,易產(chǎn)生假陽性 | 價(jià)格高 |
上月,RPA 技術(shù)的開發(fā)公司——英國TwistDx Inc的商務(wù)總監(jiān)Tony Hill來到了我公司,為我們深入介紹了RPA技術(shù),及TwistDx的各類產(chǎn)品。
Tony還與我公司的技術(shù)人員一同拜訪上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院及上海閱爾基因技術(shù)有限公司,分別向趙凱研究員及其研究生,以及閱爾基因的研究人員介紹了RPA 技術(shù),解答他們在使用中遇到的問題。
英國TwistDx公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年,基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過突破等溫DNA擴(kuò)增,開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA),被譽(yù)為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。
TwistDx以此技術(shù)為基礎(chǔ)生產(chǎn)的核酸擴(kuò)增類產(chǎn)品,能在恒定且較低的溫度下,僅用10~20分鐘,進(jìn)行單分子核酸檢測。這一技術(shù)對環(huán)境、硬件設(shè)施的要求很低,對于生物防護(hù)、水體檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、醫(yī)療診斷、微流體、獸醫(yī)等方面都有良好的應(yīng)用。
RPA擴(kuò)增的各種體系試劑盒中,含有DNA、RNA擴(kuò)增所需的所有試劑,研究者只要準(zhǔn)備好引物和模板就行了。擴(kuò)增結(jié)果可以分別通過凝膠電泳檢測、熒光定量檢測或試紙條檢測,產(chǎn)物純化后可用于下游研究。
默瑞(上海)生物科技有限公司與英國TwistDx公司達(dá)成戰(zhàn)略合作,負(fù)責(zé)RPA技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品在中國大陸地區(qū)的推廣。
默瑞(上海)生物科技有限公司(Morey Biosciences ,Inc .簡稱默瑞生物)成立于2016年7月22日,于8月1日正式運(yùn)營,其前身是一家具有15年代理銷售生命科學(xué)儀器的專業(yè)公司。默瑞生物以此為經(jīng)營理念。默瑞擁有兩個(gè)產(chǎn)品部,儀器部和試劑部。
儀器部主要代理產(chǎn)品有:Leica顯微系統(tǒng),Merck Millipore實(shí)驗(yàn)室純水超純水儀及配套耗材,Roche實(shí)時(shí)定量PCR儀、核酸純化,Beckman流式細(xì)胞儀、離心機(jī),IKA桌面小儀器,Lonza 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng),Miele清洗機(jī),Tecan酶標(biāo)儀、液體工作站等。
試劑部主要代理產(chǎn)品有: TwistDx恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒,Echelon酯類研究試劑,Jackson ImmunoResearch抗體,MTI-GlobalStem細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,ChromoTek標(biāo)簽抗體, Horizon Discovery測序標(biāo)準(zhǔn)品和細(xì)胞,Enzymatics二代測序酶, Biomatik公司Elisa試劑盒,BiosPacific抗體抗原,bioWORLD植物生長劑,Nanocs PEG修飾劑,Spectrumlabs透析袋,Brighter Ideas熒光蛋白,Lumiprobe熒光染料,Polysciences微球,Emfret心血管疾病研究抗體, Iduron糖胺聚糖產(chǎn)品,JenaBioscience分子試劑,eENZYME病毒研究工具等。