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默瑞生物推出--RPA引物、探針設計服務

發(fā)布時間: 2022-11-25  點擊次數(shù): 1491次

  2006年Piepenburg等研發(fā)的重組酶聚合酶擴增技術(recombinase polymerase amplification,RPA),該技術可以在37~42 ℃條件下實現(xiàn)待測靶標的快速檢測。它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優(yōu)點,特別適用于基層和現(xiàn)場即時檢測。

      RPA反應由3種關鍵酶(重組酶Uvs X、單鏈結合蛋白Gp32以及鏈置換DNA聚合酶)、能量供應體系(三磷酸腺苷、磷酸肌酸以及肌酸激酶)、穩(wěn)定反應體系(Tris、醋酸鉀、高分子量聚乙二醇以及二硫蘇糖醇等)、三磷酸脫氧核糖核苷酸(deoxyribonucleotide triphosphate,dNTP)、醋酸鎂等成分組成。

RPA技術反應原理

 

 

 

 

 

   RPA反應基本原理如下圖,主要包含5個階段:

(1)在三磷酸腺苷供能的條件下,重組酶輔因子(Uvs Y)協(xié)助Uvs X與反應體系中的引物結合,形成酶-引物復合體,該復合體在反應體系中尋找雙鏈DNA同源序列[3];


(2)在同源序列處發(fā)生鏈交換反應形成D環(huán)結構,同時Gp32與被置換的DNA單鏈結合進一步穩(wěn)定D環(huán)結構;


(3)Uvs X從酶-引物復合體中解離,DNA聚合酶識別引物游離的3′-OH端,添加dNTPs啟動擴增反應;


(4)模板母鏈分離,DNA子鏈合成;


(5)兩DNA子鏈合成完畢。該過程不斷循環(huán)實現(xiàn)檢測靶標的指數(shù)擴增直到反應體系中能量消耗殆盡。

圖片1.png

重組酶聚合酶擴增反應原理圖

影響RPA擴增的關鍵因素:引物和探針設計

 

 

 

 

 

      目前,仍沒有一款專用的軟件可供用戶設計RPA反應所需的引物和探針。RPA引物、探針設計對RPA反應有重要影響,RPA引物長為30~35個堿基,不同引物、探針組合有不同的擴增效率,為達到實驗預期,進行多次篩選是必要的。探針堿基錯配將影響擴增效率,出現(xiàn)假陽性結果并總結了熒光檢測法探針的要點(熒光基團與淬滅基團之間1~2個堿基,盡可能降低G含量等)。

默瑞生物推出RPA引物/探針設計服務

 

 

 

 

 

       基于多年來默瑞生物對Twistdx RPA相關產品的市場推廣工作,我們有多年豐富經驗的技術服務團隊。應廣大科研工作者的實際需求,推出以下服務項目。

 

客戶可根據(jù)自己需求填寫提供信息(表1),并選擇如下以下服務方案(表2):

表1:

RPA檢測方法

Basic(普通電泳法)、

 

exo(熒光定量法)

 

fpg(熒光定量法)

 

nfo(試紙條法)

 
 

檢測靶標信息

序號

物種名稱

基因名稱

基因信息(NCBI登錄號)

靶序列信息

         

表2:

方案

靶標

引物

探針

crRNA

設計周期

1

413.png

      1周
2

413.png

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    2周
3

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  3周
4

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4周

 

方案1甲方提供物種名稱,乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息(NCBI登錄號)、靶標基因序列信息;并出具電子版靶標基因序列信息報告一份;


方案2甲方提供物種名稱,乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息(NCBI登錄號)、靶標基因序列信息,同時乙方針對該靶點設計出三對引物供甲方篩選,并出具電子版引物信息報告(含引物特異性分析);   

  

方案3:甲方提供物種名稱,乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息(NCBI登錄號)、靶標基因序列信息,同時乙方針對該靶點設計出三對引物和一條探針供甲方篩選,并出具電子版引物信息報告(含引物特異性分析);


方案4:甲方提供物種名稱,乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息(NCBI登錄號)、靶標基因序列信息,同時乙方針對該靶點設計出三對引物、一條探針和三條相對應的CRISPR-RNA(crRNA)供甲方篩選,并出具電子版引物信息報告(含引物特異性分析);


方案5:甲方提供物種名稱,乙方提供全套的RPA或RPA-CRISPR技術服務,包括診斷靶標的基因篩選、引物和探針的設計、特異性和靈敏度實驗驗證、實際樣品檢測及驗證等。

 

交貨期:自合同生效之日起3個月內。默瑞生物。

默瑞生物

 

 

 

 

 

默瑞生物創(chuàng)立以來,已經陸續(xù)導入TwistDx,enzymatics,KAPA BIOSYSTEMS,BioDynami,Jackson,Echelon,ChromoTek,Nanocs,Biotechrabbit,Lee Biosolutions, magtivio等優(yōu)質國際品牌,逐步培育成為專業(yè)用戶的選擇。

  產品包含核酸和蛋白兩大產品線。

  (1)核酸產品線提供從樣品破碎儀,核酸質控,核酸電泳,凝膠成像,到質粒純化Kit,快速內切酶,T4 DNA連接酶,PCR Mix等,給您的核酸研究工作帶來方便快捷全新的體驗。

  (2)蛋白產品線提供從樣品處理到蛋白定性,定量,到蛋白Mark,封閉液,PBS,化學發(fā)光成像儀,產品做到很好,追求好的客戶體驗,是我們的理念。

  代理儀器產品有:Leica顯微系統(tǒng),Merck Millipore實驗室純水超純水儀及配套耗材,Roche實時定量PCR儀,Partec流式細胞儀等。

  代理試劑產品有:TwistDx恒溫擴增試劑盒,Echelon脂類研究試劑,KAPA BIOSYSTEMS二代測序試劑, Enzymatics二代測序酶,Jackson ImmunoResearch抗體,ChromoTek熒光蛋白及抗體,Horizon Discovery測序標準品,Biomatik公司Elisa試劑盒,Nanocs PEG修飾劑,Spectrumlabs透析袋,Polysciences微球,JenaBioscience分子試劑,Lifespan Technologies硫酸葡聚糖ELISA試劑盒及抗體,Lee Biosolutions抗體,Emfret心血管研究抗體,Magtivio B.V.DNA提取磁珠,Biontex Laboratories轉染試劑,Canvax™細胞凋亡檢測試劑盒,Matriks Biotek®生物藥物檢測試劑盒,Immunostep流式細胞術抗體,F(xiàn)uller Laboratories感染性疾病檢測試劑盒,SICGEN抗體,biotechrabbit酶及抗體等。

 

 

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